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體外診斷試劑中不同靈敏度的檢測方法確定

2022-02-11 09:58:56 天緯化學(xué)小編 386

空白限值的一般方法為:對于一個給定的檢測方法,開發(fā)或制造商測定后給出一系列空白樣本的結(jié)果和一系列低濃度樣本的結(jié)果??瞻讟悠返臏y定用于提供一個閾值,從而可以判斷在測定結(jié)果比閾值高的樣本中含有分析物。對于空白檢測值對稱分布的情況。可通過檢測一定數(shù)量的陰性樣品或正常樣品,樣品的數(shù)量要根據(jù)樣品的離散情況來定,計算樣品的均值及標(biāo)準(zhǔn)差,均值加上2個標(biāo)準(zhǔn)差即為空白限值,即在空白限值以上的樣品有95%的可能為真陽性。


檢測方法常以用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本,重復(fù)測定20次,計算20次測量結(jié)果RLU(相對發(fā)光值)的平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD),得出M+2SD的RLU值。然后再轉(zhuǎn)換成濃度單位。對于檢測值小于零不報道或非對稱分布的空白值(非高斯分布的空白值)。95%分位值必須用其他方法。最直接的方法是應(yīng)用統(tǒng)計原理基于值大小排列,95%百分位數(shù)可估計為空白限值。要確定檢出限必須考慮尋找一個檢測結(jié)果有特定概率的可能性超過空白限值的最小濃度樣本,如檢測結(jié)果95%的可能性超過空白限值。


在實(shí)際工作中應(yīng)采用考察空白限值的同時進(jìn)行多份低濃度樣本的檢測,計算低濃度樣本的總標(biāo)準(zhǔn)偏差,根據(jù)公式LOD=LOB+cBSD計算檢出限,其中LOD為檢出限、LOB為空白限值、CB為校正因子、SD為低濃度樣本的總標(biāo)準(zhǔn)偏差。在驗證檢}乜限時采用的方法為檢測含有標(biāo)示檢出限量值濃度的樣本,計算檢測結(jié)果超出空白限值的比例。定量限確定的方法和檢出限類似,驗證方法也類似。在定性試驗中進(jìn)行臨界值的確定有許多種方法。如以陰性對照均值加上兩倍或三倍標(biāo)準(zhǔn)偏差作為臨界值、以百分位數(shù)法單側(cè)95%或99%來確定臨界值、使用ROC曲線設(shè)定臨界值等。臨界值的驗證可以通過制備在臨界值上下20%左右濃度的樣本進(jìn)行。


一般來說,臨界值上下20%左右為95%區(qū)間??梢赃M(jìn)行重復(fù)檢測,看檢測結(jié)果是否滿足95%的陰性和95%的陽性,從而判斷臨界值的確定是否合適。美國國家臨床標(biāo)準(zhǔn)研究院(CLSI)發(fā)布了EP一17的標(biāo)準(zhǔn)化文件。該文件提出空白限值(LOB)、檢H;限(LOD)以及定量限(LOQ)的定義和實(shí)驗方案。


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